Q1:洗板的作用是什么?
去除未结合的抗原、抗体和其他杂质,减少非特异性反应,提高检测的灵敏度、特异性和准确性。
Q2:如何配置洗涤液?
本公司ELISA试剂盒配套的洗涤液为30mL, 25X浓缩洗涤液,最多可供96T规格的试剂盒使用。例如,本次实验需要做48孔(标曲孔+样本孔),则需取25X浓缩洗涤液体积为:30mL*48/96=15mL,随后按照1:24的比例添加双蒸水稀释,即15mL 25X浓缩洗涤液和15*24mL=360mL双蒸水稀释混匀。
Q3:洗板的方法一般有哪些?
手工洗板和洗板机洗板
Q4:洗板时每孔加入多少量的洗涤液?
一般的ELISA实验工作体系不会超过200μL, 而大多数酶标板的单孔容积为350μL左右,为保证洗涤效果,洗涤液需超过工作体积,ELISA实验洗涤液一般为300μL/孔
Q5:洗板次数不足会导致什么问题?如何解决?
现象:背景信号高(假阳性)、非特异性结合残留整板全蓝的情况。原因:未充分去除未结合的抗体或抗原。解决:按说明书要求次数洗板。
Q6:过度洗板会导致什么问题?
洗板过度会洗掉已经结合好的抗原抗体复合物,导致整体显色变弱,甚至“白板”。所以应严格按照说明书要求次数洗板。
Q7:洗板时的哪些操作会导致孔间交叉污染?
- 用多通道移液器添加洗涤液时,枪头伸进页面以下甚至戳到孔底。
- 洗涤液添加过量溢出到其他孔导致交叉污染。应该选择高精度的移液器和吸头,使用前还需检查确保吸头安装紧密。
- 甩干时手法不正确,导致各孔之间的洗涤液交叉污染。正确的做法应该是手腕用力,迅速翻转甩干。
- 拍板时,反复拍在吸水纸的同一个位置。正确的方法应该是,拍完一下之后,吸水纸上有肉眼可见的水渍时应立即更换新的吸水纸。
Q8:洗板后的下一步加样的试剂应该在洗板之前配好还是洗板之后配好?
在洗板前的这次孵育完成之前提前配好下一步的试剂。如果洗完板之后配,就会使干燥的板孔暴露在空气中一段时间,这个操作会使反应物损失一定程度的活性。
Q9:拍板用的吸水纸的选择和使用有何要求?
选择洁净无尘,不易掉落碎屑、吸水性好的吸水纸。拍板时不可多次重复拍一个地方,避免重复使用。
Q10:拍板时一般拍几次可以完全拍干?
洗板后拍干这个步骤不同的人的力度和手法不同,因此拍干所需次数也不一定,正常3-5次。一般通过观察吸水纸,拍过的位置没有明显的水渍即可。
Q11:洗涤液的成分一般是什么?
洗涤液一般由pH 7.4的PBS(磷酸盐缓冲液)或TBS(Tri缓冲液)组成,然后加入0.05%-0.5%的Tween-20或Triton X-100等去垢剂。部分实验室会加入一定量的BSA或NaN₃(本公司洗涤液不含BSA和NaN₃)或者为了提供离子强度加入一定量的生理盐水(0.9%NaCl)。
Q12:不同公司的洗涤液或者自己配的洗涤液可以混用吗?为什么
不可以。不同公司的实验体系不同,不同的洗涤液的成分配方也不同,贸然混用,极有可能导致洗涤液和实验体系不适配,造成不可预料的实验结果。
Q13:浓缩洗涤液,瓶内出现颗粒物或沉淀,是洗涤液变质了吗?
本公司的洗涤液为25X浓缩洗涤液,溶质浓度相对较高,由于长期静置或温度变化,会有一定程度的结晶析出,这属于正常现象,使用前可通过轻轻摇晃或37℃水浴至完全溶解。