技术专栏

1. 如何在采血过程中避免溶血？

发生溶血的主要原因有：

① 机械性损伤：采血速度过慢或者过快、暴力混匀、针头过细（<22G）、反复采血；

② 操作不当：酒精未完全挥发采血、抽血时负压过大、血液注入采集管时冲击力过强；

③ 样本分离制备：长时间处理、过高的离心力或反复冻融样本；

④ 麻醉采血：使用了溶血作用的麻醉剂；

图1 人采血过程图和上清黄色部分的正常血清血浆颜色图

 

因此，我们有如下建议：

① 采血前：选择合适的采血针头，采血前确保酒精完全挥发；如果进行麻醉采血，建议使用无溶血作用的麻醉剂；

② 采血中：保持针头稳定，避免在血管内调整针头位置，防止红细胞破裂；控制抽吸速度，避免强力抽拉注射器，应让血液自然流入；

③ 采血后：轻柔移除针头，沿试管壁缓慢注入血液，避免气泡和冲击力；立即轻柔颠倒混匀采血管5-8次，禁止震荡；

④ 样本制备：按照推荐的温度和转速处理样本，避免时间过长或过高的离心力造成溶血；尽量避免反复冻融样本；

图2 采血注意事项图

 

2. 在ELISA实验中为什么不建议使用溶血样本？如果发生了溶血，有什么挽救的方法吗？

溶血后的样本会释放内源性HRP酶和血红蛋白，它们具有类似HRP的活性，与生物素化抗体非特异性的结合，导致ELISA出现不可控的非特异性显色，干扰实验结果的准确性。

溶血分以下情况：

① 样本肉眼可见呈现粉红色，此为轻度溶血；

② 样本肉眼可见呈现红色以及深红色，此为重度溶血；

③ 样本肉眼可见黑红色，此为氧化重度溶血；

第①种情况，可以再次离心取上清，第②种和第③种情况则建议重新收集样本！