产品名称 | Rat MT(Melatonin) ELISA Kit | 反应种属 | Rat |
Uniprot ID | N/A | 别称 | N-Acetyl-5-Methoxytryptamine |
检测方法 | 竞争法 | 灵敏度 | 9.38 pg/mL |
标准品 | 1000pg/mL | 检测范围 | 15.63-1000pg/mL |
样品类型 | Serum, Brain dialysate;Sample Volume=50μL | ||
检测时间 | 1.5小时 | 研究领域 | Kidney diseases |
测试原理 | 本试剂盒采用竞争ELISA法。用大鼠 MT抗原包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠 MT与包被的大鼠 MT竞争生物素标记的抗大鼠 MT单抗上的结合位点,游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,D2D浓度与OD450值之间呈反比,通过绘制标准曲线计算出样品中D2D的浓度. |
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | OD |
---|---|
1000.00 | 0.264 |
500.00 | 0.364 |
250.00 | 0.558 |
125.00 | 0.819 |
62.50 | 1.114 |
31.25 | 1.509 |
15.63 | 1.823 |
0.00 | 2.487 |
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
Intra-assay Precision | Inter-assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(pg/mL) | 48.87 | 130.91 | 386.32 | 51.46 | 151.47 | 327.28 |
Standard deviation | 0.59 | 10.09 | 15.29 | 2.68 | 11.74 | 23.48 |
C V (%) | 3.18 | 6.74 | 2.87 | 8.01 | 3.11 | 4.95 |
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range(%) | Average Recovery(%) |
---|---|---|
Serum (n=8) | 88-103 | 95 |
EDTA plasma (n=8) | 92-106 | 99 |
Cell culture media (n=8) | 90-105 | 97 |
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) | ||
---|---|---|---|---|
1:2 | Range (%) | 88-103 | 95-106 | 93-102 |
Average (%) | 90 | 106 | 102 | |
1:4 | Range (%) | 83-94 | 95-106 | 90-99 |
Average (%) | 89 | 96 | 96 | |
1:8 | Range (%) | 92-105 | 88-103 | 95-106 |
Average (%) | 101 | 90 | 100 | |
1:16 | Range (%) | 89-97 | 81-98 | 87-101 |
Average (%) | 97 | 89 | 100 |